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实验介绍
评估啮齿动物运动协调能力和平衡能力的测试。让小鼠保持直立,并穿过高架窄梁到一个安全的平台上。
操作准备
(1)动物准备:性别,周数尽量保持一致。室温(23±2℃),光照12h(18:00-6:00),黑暗12h(6:00-18:00),自由饮水进食饲养,预适应环境一周后,取材质量(20±2)g小鼠正式进行实验(所有实验均于6:00-18:00进行)。选择合适小鼠,随机分配。在试验开始前至少 2 周适应行为设施中的笼子;
(2)器材准备:横梁装置由 1 米长的横梁(宽度12mm\6mm\28mm)组成,横梁位于两根支柱上,高出桌面 50 厘米。在两端10cm处划线标记。一般训练时,小鼠使用12mm横梁,大鼠28mm横梁。
在横梁的末端放置一个黑色盒子作为终点。在黑盒子里放置家庭笼子里的筑巢材料,以吸引老鼠到终点。一盏灯(用 60 瓦灯泡)照射起点上方,作为厌恶刺激。小鼠穿过中心 80 厘米处的时间通过两个运动探测器进行测量:一个位于 0 厘米处,用于启动计时器;另一个位于 80 厘米处,用于停止计时器。尼龙吊床(可从当地的布料店购买)被绷在横梁下方,高出桌面约 7.5 厘米,以缓冲任何跌落。摄像机安装在三脚架上,用于记录表演过程。
操作步骤
1、在训练日,每只小鼠穿过 12 毫米横梁 3 次,然后穿过 6 毫米横梁 3 次。对于无法穿过较窄横梁的小鼠或体型较大的小鼠,可使用较宽的横梁(如 28 毫米)。将小鼠放在横梁的一端,小鼠穿过横梁到达另一端的逃生箱所需的时间为通过时间(单位:s)。如果未能成功通过,记录时间为60s;
2、小鼠的鼻子进入中间 80 厘米处开始计时,当小鼠到达 80 厘米处的尽头时停止计时。在两根横梁上进行训练的间隙,将小鼠放回自己的笼子里休息 10 分钟。在这段时间内,可再训练 3-4 只小鼠,以有效利用时间;
3、小鼠进入安全箱后,允许它们休息一段时间(约 15 秒),然后再进行下一次试验。每次训练结束后,小鼠会被直接放回它们的笼子,并被带回它们的饲养室;
4、测试当天,记录小鼠穿越每根横梁的时间。至少测试两次,取小鼠没有在横梁上停滞的两次成功试验取平均值;
5、视频记录小鼠60s内录像;
6、横梁和箱体上的老鼠粪便要清理干净,并用毛巾蘸 75% 的乙醇和水擦拭,然后才能进行下一次实验。
数据分析
1、小鼠没有在横梁上停滞的两次成功试验取平均值;
2、视频记录可用于对滑倒和其他可观察到的运动障碍进行更精细的分析。评估横梁行走的另一种方法是神经评分系统,该系统将无法穿过横梁评为 “1 ”分,将双爪在横梁表面正常穿过横梁的能力评为 “2 ”分。双爪在横梁表面且脚部滑动少于两次的能力为 “7 ”分。滑脚的定义是脚从横梁顶端脱落。在这个在这一指标体系中,得分 “3 ”对应的是拖着四肢通过横梁。在两次试验中均得 1 分的动物将不再进行重新测试。关于横梁上的表现与其他得分的关系,可参见 Feeney 等人(1982 年)和 Carter 等人(2001 年)。
注意事项
1、如果训练过度,小鼠对任务和仪器过于熟悉,可能会出现更多的停滞;
2、如果训练两天后,小鼠仍不能成功穿越整个横梁,则可继续训练几天;
3、如果要对小鼠进行治疗,则应在治疗前测量小鼠的基线表现;
4、基线水平(在小于 20 秒的时间内穿越 12 毫米宽的横梁);
5、当小鼠出现停滞、嗅探或环顾四周而不前进时研究人员应该用戴手套的手指从后面探、戳或推小鼠,鼓励它们继续前进;
6、现在改良可以将横梁倾斜15°,让小鼠从下端往上爬,每次选用的横梁用随机数表选择消除练习效应。
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