一张标准 WB 图通常包含

1、蛋白 Marker（分子量标准）：显示条带对应的 kDa 值，用于判断目的蛋白分子量；

2、样品泳道：对照组、处理组（如药物、转染、时间梯度等），常做生物学重复；

3、目的蛋白条带：特异性结合抗体显示的条带；

4、内参蛋白条带（如 GAPDH、β-actin、α-tubulin）：用于校正上样量差异；

5、标注：分组名称、kDa 标尺、抗体名称、曝光条件；

6、原始全膜图 + 裁剪图（论文要求，防止数据造假）。

典型实验图示例

1、常规化学发光 WB 图（灰度图，最常见）

（1）左列为蛋白 Marker；中间为目的蛋白（如 p-ERK1/2）；右侧为内参 GAPDH；泳道依次为 Control、Drug1、Drug2、Drug3 组，每组 3 个重复。

2、多靶标同膜检测

（1）同一膜剥离后，分别孵育不同一抗，检测多种相关蛋白（如 ERK1/2、p-ERK1/2、β-actin）。

3、异常条带示例（常见问题）

（1）非特异性条带：多条杂带；

（2）条带弯曲 / 拖尾：上样过多、凝胶不均、电泳条件不当；

（3）背景过高：封闭不足、抗体浓度过高。

图的解读与定量步骤

1、定性：判断目的蛋白是否表达（有条带 / 无条带）；条带位置是否符合预期分子量；

2、半定量（核心）：

（1）用 ImageJ、Image Lab 等软件测量目的条带与内参条带的灰度值；

（2）计算每组目的 / 内参比值；

（3）以对照组为 1，计算相对表达量，绘制柱状图；

（4）统计学分析：多组重复数据做 t 检验或方差分析。

论文中 WB 图的规范要求

1、必须提供 完整未裁剪的原始膜图（supplementary data）；

2、裁剪图需保持条带比例一致，不拉伸、不随意调对比度掩盖背景；

3、标注清晰：Marker 分子量、组名、重复数、抗体信息；

4、定量结果需附柱状图，标注误差线（SD/SEM）和统计学显著性（*p<0.05, *p<0.01）。

常见问题与优化

实验图的保存与处理

1、用成像系统（如 Bio-Rad ChemiDoc）保存 原始 .tiff 格式文件（不可压缩，保留灰度信息）；

2、仅做统一的亮度 / 对比度调整，严禁局部涂抹、删除条带；

3、分组整理文件夹，标注日期、样品编号、抗体批号、曝光时间。